常温运输。请于4℃保存,可稳定保存一年。
1 样品准备
血清:
1)血清样本室温,2,000×g 离心10 min,以去除残留细胞及碎片;
2)收集上清液,进行exosome提取或4℃保存。
血浆:
1)血浆样本室温,2,000×g 离心10 min,以去除残留细胞及碎片;
2)转移上清液至新的离心管中,室温,10,000×g 离心2 min,收集上清液,进行exosome提取或4℃保存。
注:若后续实验为提取RNA,建议使用500μL血清血浆;若为提取蛋白,建议使用300 μL血清血浆。
2 Exosome提取
1)转移上清液至新的离心管中,加入1/3倍上清体积的A液。
2)颠倒混匀或移液器吹打混匀,4℃放置15 min。
3)室温,13,000×g离心10 min,小心吸弃上清;13,000×g离心30 s,小心吸弃残留上清。
4)加入与Reagent A等体积的B液,使用移液器吹打混匀,13,000×g离心10 min,小心吸弃上清。
5)沉淀即为exosome,-80℃保存。若提取RNA或蛋白,使用100 ~ 200 μL RNase-free H2O重悬,进行后续实验。