GS™ Exosome Isolation Reagent (for cell culture media)
常温运输。请于4℃保存,可稳定保存一年。
1 样品准备
1)用含血清的完全培养基培养细胞到密度80%左右,弃去上清,PBS洗涤2次;
2)更换无血清培养基继续培养,48小时后收集10 mL以上细胞培养上清;
3)4℃,2,000×g离心20 min,以去除残留细胞及碎片。
注:建议使用10 mL以上的细胞培养上清进行exosome提取。
2 Exosome提取
1)转移上清液至新的离心管中,加入1/3倍上清体积的本产品。
2)颠倒混匀或移液器吹打混匀,4℃放置过夜。
3)4℃,13,000×g离心10 min (或5,000×g离心30 min),小心吸弃上清。
4)4℃,13,000×g(或5,000×g)离心30 s,小心吸弃残留上清。
5)沉淀即为exosome,-80℃保存。若提取RNA或蛋白,使用30 ~ 200 μL RNase-free H2O重悬,进行后续实验。
注:提取10 mL细胞上清时,建议加入30 μL RNase-free H2O。