GSPureTM Blood Genomic DNA Kit
E0103 50 preps
E0104 100 preps
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本试剂盒采用高效的裂解结合缓冲液系统提取血液基因组DNA,结合本公司特有的新型材料,可高效、专一吸附DNA,最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
●样本适用性广:可从新鲜或冻存的抗凝血(EDTA、肝素等)、白膜层、血凝块、唾液、口腔拭子等样品中直接提取基因组DNA。
●高质量:纯化的DNA具有高浓度,高纯度,完整性好等特点。
●快速无毒:采用硅基吸附原理,无需酚/氯仿,20 min内即可完成实验。
试剂盒于室温(15 ~ 30℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存应置于2 ~ 8℃。2 ~ 8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小、提取量下降。
2.若结合缓冲液GB中有沉淀,可在58℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
3.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。
4.使用前,按瓶子标签提示,在洗涤液W1和漂洗液W2中加入无水乙醇。
1.样本预处理(本产品适用于处理0.1 ~ 1.0 mL新鲜或冻存抗凝血液样本)
*:若血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,建议取血样5 ~ 20 μL,补加无菌超纯水至200μL。
**:红细胞裂解液需自备。
2.向装有200 μL样本的1.5 mL离心管中,依次加入20 μL蛋白酶K(20mg/mL)和250μL裂解/结合液GB,涡旋震荡30 s以混匀,58℃水浴锅孵育10 min,每隔1 ~ 3 min上下颠倒5次混匀。
注意:若样本体积>200 μL,需按比例增加蛋白酶K及裂解/结合液GB。
3.将离心管从水浴锅中取出,静置2 ~ 5 min平衡至室温,加入250 μL无水乙醇,上下颠倒15次混匀,可马上进行下一步操作。
4.瞬时离心,收集管壁液体。
5.将上一步所得溶液全部转移至吸附柱DB1中(注意不要将溶液加到管口位置),10,000rpm离心15 ~ 30 s,弃去流出液,将吸附柱DB1放回收集管中。吸附柱最大装液量为750 μL,若溶液体积超过750 μL,可分多次过柱。
6.向吸附柱DB1中加入650 μL 洗涤液W1(已加入无水乙醇),10,000 rpm离心15 ~ 30 s,弃去流出液,将吸附柱DB1放回收集管中。
7.向吸附柱DB1中加入650 μL漂洗液W2(已加入无水乙醇),10,000 rpm离心15 ~ 30 s,弃去流出液,将吸附柱DB1放回收集管中。
8.重复步骤7一次。
9.将吸附柱DB1放回收集管中,12,000 rpm离心2 min。将吸附柱DB1转移至新的1.5 mL离心管中,打开吸附柱管盖,室温放置2 ~ 3 min以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
10.向吸附膜中间位置悬空滴加30 ~ 100 μL 洗脱液TB,室温放置2 ~ 5 min,12,000 rpm离心1 min,将溶液收集到离心管中,于-20℃保存。
试剂盒提取的基因组DNA片段大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关,可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/mL双链DNA、40 μg/mL单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7 ~ 1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。放置时间较长的血液,其比值也会有一定程度的降低。