GSPure^TM Cell RNA Isolation Kit

E0204  50 preps

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产品简介

本试剂盒采用硅基柱纯化技术，适合从少于1×10⁷个培养细胞样品中提取总RNA。提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，无需进行耗时的醇类沉淀，整个过程只需20 ~ 30分钟。试剂盒结合了DNA过滤技术，可高效去除基因组DNA。得到的RNA纯度高，可用于RT-PCR、荧光定量PCR、高通量测序、Northern Blot、poly A筛选、体外翻译和分子克隆等多种实验。

产品组分

保存条件

常温（15 ~ 25℃）保存，保质期12个月。

注意事项

1.GS Lysis Reagent在储存时可能会形成沉淀，若有沉淀请60℃水浴加热溶解后使用。

2.GS Lysis Reagent在使用前应先加入β-Mercaptoethanol至终浓度为1%（例如1 ml GS LysisReagent中加入10 μL β-Mercaptoethanol），加入β-Mercaptoethanol的GS Lysis Reagent 可于4℃放置一个月，但现配现用能达到最优使用效果。

3.Buffer WB 1与Buffer WB 2在使用前应按照标签说明加入无水乙醇。

4.70%乙醇应使用DEPC处理水配制。

操作步骤

1.收集细胞

1.1悬浮细胞的收集：细胞计数并转移至新的离心管中，500 g离心5 min，收集细胞沉淀，吸弃所有上清。

1.2 贴壁细胞的收集：可在培养容器中直接裂解，或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。a.直接裂解法：确定细胞数量，彻底吸弃细胞培养上清，立即进行第2步裂解处理。b.胰蛋白酶处理法：使用PBS洗涤细胞2次，吸弃PBS，胰蛋白酶消化制成细胞悬液，细胞计数并转移至新的离心管中，500 g离心5 min，收集细胞沉淀，吸弃所有上清。

注意：收集细胞时一定要将细胞培养上清完全去除，否则会导致裂解不充分，影响RNA与吸附柱的结合，造成RNA的产量降低。

2.裂解处理

2.1对于直接裂解收集的细胞：按下表加入GS Lysis Reagent（已加入β-Mercaptoethanol），将细胞裂解液转移至新的离心管中，涡旋震荡5 s。

2.2对于离心收集的细胞沉淀：轻弹离心管底部，使细胞沉淀松散，按下表加入GS Lysis Reagent（已加入β-Mercaptoethanol），涡旋震荡15 s。

3.将上述溶液转移至DNA过滤柱DR Columns中，14,000 g 离心2 min，收集滤液至新的1.5 mL离心管中。

4.向滤液中加入等体积的70%乙醇，用移液器吹打3 ~ 5次以混匀（若有沉淀形成，尽量打散沉淀，并将沉淀和溶液一起加入到RC Columns中）。

5.转移≤750μL混合液至RC Columns中，12,000 g离心30 ~ 60 s。

6.弃去滤液，将柱子装回收集管中，转移剩余的混合液（若有）至柱子中，12,000 g离心30 ~ 60 s。

7.弃去滤液，将柱子装回收集管中，向柱中加入500 μL Buffer WB1（确认已加入乙醇），12,000 g离心30 ~ 60 s。

8.弃去滤液，将柱子装回收集管中，向柱中加入500 μL Buffer WB2（确认已加入乙醇），12,000 g离心30 ~ 60 s。

9.重复步骤8一次。

10.弃去滤液，将柱子装回收集管中，12,000 g 离心2 min。

11.将柱子转移至新的RNase-Free 1.5 mL离心管中，加入30 ~ 100 μLRNase-Free H2O至柱膜中，室温静置2 min。

12.12,000 g 离心2 min，弃去柱子，得到的RNA于-80℃保存。

常见问题与解决方法

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