产品简介

本试剂盒可从新鲜血液中高效分离总RNA，基于硅基柱纯化技术，提取时无需进行耗时的醇类沉淀，整个过程只需40分钟。提取所得的RNA可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、高通量测序、Northern Blot、Dot Blot、Poly A 筛选和分子克隆等多种实验。

产品组分

20220706091645

保存条件

常温（15 ~ 25 ℃）保存，保质期12个月。

注意事项

1.10×红细胞裂解液在使用前应用DEPC水稀释至1×，并装在合适的RNase-Free瓶子中。

2.GS Lysis Reagent在储存时可能会形成沉淀，若有沉淀请60℃水浴加热溶解后使用。

3.GS Lysis Reagent在使用前应先加入β-Mercaptoethanol至终浓度为1%（例如1 ml GS LysisReagent中加入10 μL β-Mercaptoethanol），加入β-Mercaptoethanol的GS Lysis Reagent可于4℃放置一个月，但现配现用能达到最优使用效果。

4.Buffer WB 1与Buffer WB 2在使用前应按照标签说明加入无水乙醇。

5.单个样品中最多可处理1×10⁷个白细胞，健康人体血液中白细胞含量为4000 ~ 7000个/μL，病人血液中白细胞含量可能会升高，此时可减少血液的用量。

6.血液收集最好使用EDTA进行抗凝，并尽快提取RNA或于2 ~ 8℃短时保存，避免冻存。

操作步骤

白细胞的分离与保存

1.自备离心管中加入1倍体积血液（≤1.5mL）和4倍体积1×红细胞裂解液，颠倒混匀5 ~ 10次。例如使用1.5 mL血液，则加入6 mL 1×红细胞裂解液。

注意：试剂盒中提供10×红细胞裂解液，使用前须用DEPC水稀释至1×。

2.冰上放置10 ~ 15min，期间颠倒混匀两次。

注意：在放置过程中，溶液会从雾状变为透亮，表明红细胞已裂解。处理病人的血液时，可能需要延长至20分钟。

3.4℃，2,000 rpm（~ 500 g）离心10 min，小心倒弃上清液。

4.向沉淀中加入2倍体积1×红细胞裂解液，重悬细胞。例如使用1.5 mL血液，则加入3 mL 1×红细胞裂解液。

5.4℃，2,000 rpm（~ 500 g）离心10 min，尽量去除上清，得到白细胞沉淀，可直接进行RNA提取或于-80℃保存。

RNA的提取

6.按下表向白细胞沉淀中加入GS Lysis Reagent（确认已加入β-Mercaptoethanol），涡旋震荡15 s以混匀。

7.将上述溶液转移至DNA过滤柱DR Columns中，12,000 rpm (~13,400 g)离心2 min，收集滤液至新的1.5 mL离心管中。

8.向滤液中加入1倍体积异丙醇和1/10体积PH Solution（例如使用350 μL GS Lysis Reagent，则加入350 μL异丙醇及35 μL PH Solution)，吹打混匀，转移至RNA结合柱RC Columns中，12,000 rpm(~13,400 g) 离心30 ~ 60 s。

9.弃去滤液，将柱子装回收集管中，向柱中加入700 μL Buffer WB 1（确认已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400 g) 离心30 ~ 60 s。

10.弃去滤液，将柱子装回收集管中，向柱中加入500 μL Buffer WB 2 (确认已加入无水乙醇)，室温静置2 min，12,000 rpm (~13,400 g) 离心30 ~ 60 s。

11.重复步骤10一次。

12.弃去滤液，将柱子装回收集管中，12,000 rpm (~13,400 g) 离心2 min。

13.将柱子转移至新的RNase-Free 1.5 mL离心管中，加入30 ~ 50 μL RNase-Free H2O至柱膜上，室温静置2 min。

14.12,000 rpm(~13,400 g) 离心2 min，弃去柱子，得到的RNA于-80℃保存。

常见问题与解决方法

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