T4 RNA Ligase 1

产品规格

产品简介

T4 RNA Ligase 1，即T4 RNA连接酶1，是一种依赖ATP的可以催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。可用于ssRNA的分子间连接；ssRNA与ssDNA的分子间连接；ssRNA 3′-OH末端用放射性同位素5’-[ 32P]pCp等的标记；单链Oligo RNA及Oligo DNA的合成；tRNA的特别修饰；在蛋白质中引入非天然氨基酸等。

来源：大肠杆菌表达的重组蛋白，表达基因的来源为T4嗜菌体。

产品组分

Storage Buffer：10 mM Tris-HCl（pH 7.4），50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol

10X Reaction Buffer：500 mM Tris-HCl (pH 7.5)，100 mM MgCl₂，10 mM DTT

失活或抑制：65℃加热15 min或煮沸2 min可使其失活或加入10%体积的0.5 M EDTA( pH8.0)也可以终止反应。

质量控制

1、无RNase、DNase污染。

2、经考马斯亮蓝染色的SDS-聚丙烯酰胺凝胶染色判断，其纯度>90%。

活性单位定义

在37℃下，在5’末端浓度为10 µM时，在30 min内催化1 nM的5’-[32P]rA16形成抗磷酸酶形式所需的酶的量被定义为一个单位。

反应体系

1、对于单链RNA的环化连接反应，请于冰盒上按下表配制反应体系：

2、对于单链RNA或DNA的分子间连接反应，请于冰盒上按下表配制反应体系：

注意：

（1）由于涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要是RNase free的。由于涉及单链RNA，可以考虑适量添加RNase Inhibitor，推荐反应终浓度为1-2 U/µL，即使不添加RNase Inhibitor时也可以获得良好的连接效果。

（2）上述表格中ssRNA的用量已经比较大，对于样品比较少的情况下，可以大幅减少ssRNA的用量的。

（3）根据连接反应的类型，推荐在反应体系中加入适量的PEG8000。建议连接单链RNA或DNA的分之间连接反应体系中PEG8000的终浓度为15%-25%，这样既不影响反应特性也可以显著提高酶活性。

反应条件

37℃孵育30 min。如果发现效果欠佳可以尝试25℃孵育2 h或16℃孵育16 h。为了使连接反应更加充分，可以适当延长连接反应时间。

注意事项

1、本产品连接的底物无论是单链RNA还是单链DNA，都需要确保5’末端磷酸化或腺苷酰化，同时3’末端是羟基；

2、如果连接底物为双链RNA或DNA，推荐使用T4 RNA Ligase 2等；

3、可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如RNase inhibitor、DEPC水等；

4、本试剂盒提供的ATP浓度为10 mM，请根据实际操作进行稀释使用；

5、本产品仅限于专业人员的科学研究用，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。