产品简介

CircGFP是编码增强型绿色荧光蛋白基因的环状RNA，转染真核细胞后可在细胞内翻译表达出GFP绿色荧光蛋白，可作为环状RNA转染的阳性对照。

产品规格

产品干冰运输。-80℃超低温保存，可以稳定存放一年。

1.请严格遵循RNA的操作规则，实验过程中请戴好手套和口罩，避免外界因素导致产品降解。

2.首次使用时，请将产品瞬时离心，尽可能避免多次反复冻融，不要涡旋震荡。

3.实验过程中，请将本产品置于冰上，使用完毕后请于-80℃保存。

本实验方法以使用Lipofectamine® 3000转染试剂于12孔板转染1μg/μL CircGFP为例，其它规格转染体系请参考下表，使用其它转染试剂请参考具体转染试剂说明书。

（1）接种细胞

转染前一天将细胞铺至12孔板，使转染时的细胞密度达到约60%-70%。

注：不同细胞生长速度不同，接种细胞的数量、细胞密度需要依据细胞类型、培养时间、实验目的而定，一般情况以控制到检测时细胞接近长满为宜；每孔接种的细胞数量应尽量相同，使细胞均匀分布。

（2）转染

对于每个转染样品，请按下面的步骤进行准备：

1）溶解circRNA：先将冻干粉产品瞬时离心，加入10μL Nuclease-free Water至10 μg的CircGFP冻干粉中，制成1μg/μL CircGFP的溶液；

2）稀释转染试剂：50μL Opti-MEMTM Medium（V1）中加入3μL Lipofectamine® 3000Transfection Reagent（V2），轻轻混匀，室温孵育10 min；

3）稀释circRNA：另一管50μL Opti-MEMTM Medium（V1）中加入3μL的P3000TM试剂和1μL的1μg/μL CircGFP（V3），轻轻混匀；

4）将稀释好的转染试剂与稀释好的CircGFP混合，室温孵育5 min；

5）12孔板每孔更换新鲜完全培养基900μL（V4）；

6）将100μL CircGFP转染混合液，加入到含900 μL完全培养基的细胞中，轻轻混匀；

7）将细胞置于37℃的CO2培养箱中培养24 - 48小时；

8）使用荧光倒置显微镜、激光共聚焦显微镜等荧光检测仪器检测GFP荧光。

CircGFP能够在真核细胞中高效进行GFP蛋白翻译。下图为使用制备的CircGFP转染293T细胞的案例。

图1：CircGFP转染293T细胞48h后荧光检测结果。放大倍数：100x。左：明场。右：荧光。