DNA Clean Beads
DNA Clean Beads基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization) 原理,可用于高通量测序文库构建过程中的DNA纯化与片段大小分选。本产品可兼容各品牌的DNA、RNA建库试剂盒以及文章报道的建库流程;与目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式完全相同,文库的产量、大小分布与片段回收率均与AMPure XP Beads高度一致,可完美替代AMPure XP Beads。
冰袋运输,2℃~ -8℃保存,有效期一年,避免冷冻。
1、准备工作
将DNA Clean Beads从2 ~ 8℃冰箱取出,至少在室温平衡半个小时。并配制80%乙醇。
2、DNA纯化
1)颠倒或旋涡振荡使磁珠液充分混匀,使用移液器根据回收的片段大小吸取适当体积磁珠液加入DNA样品中,轻轻吸打10次充分混匀。
2)室温孵育5-10 min,使DNA结合到磁珠上。
3)将样品置于磁力架上,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。
4)保持样品始终处于磁力架上,加入200 μl新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec,小心移除上清。
5)重复步骤4一次,总计漂洗二次。
6)保持样品始终处于磁力架上,室温下开盖干燥磁珠约5 - 10 min。
7)将样品从磁力架上取出,加入适量无核酸酶水,涡旋振荡或使用移液器吹打充分混匀,室温静置2 min。在磁力架上静置5 min待溶液澄清后,小心吸取上清至一个新的无核酸酶离心管中。
3、DNA片段分选
1)颠倒或旋涡振荡使磁珠液充分混匀,使用移液器根据分选条件说明吸取适当体积磁珠液加入DNA样品中,轻轻吸打10次充分混匀。
2)室温孵育5-10 min,使DNA结合到磁珠上。
3)将样品置于磁力架上,待溶液澄清后(约5 min),小心吸取上清至一个新的无核酸酶离心管中。
4)加入适量磁珠液(第二轮分选),使用移液器吸打10次充分混匀。
5)室温孵育5-10 min,使DNA结合到磁珠上。
6)将样品置于磁力架上,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。
7)保持样品始终处于磁力架上,加入200 μl新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec,小心移除上清。
8)重复步骤7一次,总计漂洗二次。
9)保持样品始终处于磁力架上,室温下开盖干燥磁珠约5 - 10 min。
10)将样品从磁力架上取出,加入适量无核酸酶水,涡旋振荡或使用移液器吹打充分混匀,室温静置2 min。在磁力架上静置5 min待溶液澄清后,小心吸取上清至一个新的无核酸酶离心管中。
1、为了您的健康和安全,请穿戴实验服与一次性手套和口罩操作。
2、磁珠使用前须在室温平衡至少30 min,这样可以保证DNA的回收率。使用前,请旋涡振荡或充分颠倒以保证混匀。
3、80%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率;80%乙醇洗涤时,需要保持样品管静置于磁力架上,并且不要搅动磁珠。晾干时,要避免磁珠过分干燥。
4、在进行DNA长度分选时,初始样品体积需≥100 μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小,将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性。
5、本产品仅用作科研用途!