GS™ T7 Biotin Labeled RNA Synthesis Kit

R0402  3 rxns

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产品简介

本试剂盒利用重组T7 RNA聚合酶，以Biotin-NTP Mix为底物，在体外快速高效合成含生物素标记的RNA。合成的生物素标记RNA可用于RNA Pull-down、Northern Blot、原位杂交等实验。使用1 μg DNA模板时，每次反应中RNA生成量不低于50 μg。

产品组分

*：使用20μL体系时，本试剂盒可进行3次转录反应。

**：Biotin-NTP Mix内含ATP, GTP, CTP, UTP和Biotin-16-UTP，其中UTP与Biotin-16-UTP的比例为2:1。

保存条件

低温运输，-20℃保存，保质期12个月。

自备材料

1.RNA纯化回收：TRIzol LS Reagent、磁珠或过柱纯化试剂盒。

2.RNA检测：微量分光光度计、Qubit荧光计、琼脂糖凝胶电泳设备或Agilent 2100等。

3.其他试剂与耗材：RNase-Free或DEPC处理的PCR管和吸头等。

操作流程

1.DNA模板制备

使用含有T7启动子序列的线性化质粒、PCR产物或合成的寡核苷酸为模板，模板应保证高纯度高质量，避免RNase、蛋白质、RNA或盐类污染。

以线性化质粒为模板的，应使质粒线性化形成平末端或5’突出末端，线性化后应进行琼脂糖凝胶电泳检测，确保线性化切割完全，并纯化回收。在20 μL反应体系中，线性化质粒模板可使用0.5~1 μg。

以PCR产物为模板的，可在引物上加入T7启动子序列进行PCR扩增，确保T7启动子序列的方向正确。PCR产物应进行琼脂糖凝胶电泳检测，确保条带单一且大小正确，并纯化回收。在20 μL反应体系中，PCR产物模板可使用0.2~0.75 μg。

2.RNA转录合成

1)从试剂盒中取出各组分试剂，冰上融化颠倒混匀，短暂离心后置于冰盒上备用。

2)按照下表依次添加试剂，配置反应体系。

3)颠倒混匀并短暂离心，置于PCR仪上37℃孵育2 h。合成小于300 nt的短链RNA时应37℃孵育4~16 h。

3.DNA模板去除

向反应液中依次添加68 μL RNase-Free Water，10 μL 10× DNase Reaction Buffer，和2 μL RNase-Free DNase I (1 U/μL)，置于PCR仪上37℃孵育15 min。

4．纯化回收

使用TRIzol LS Reagent、磁珠或RNA柱纯化试剂盒，纯化回收生物素标记的RNA。

5．RNA检测

1)定量检测

使用微量分光光度计（如Nanodrop）或Qubit荧光计检测RNA的浓度和纯度。

2)电泳检测

使用琼脂糖凝胶电泳或Agilent 2100检测RNA的大小和完整性，生物素标记的RNA分子量增大，条带大小可能比预期偏大。使用非变性琼脂糖凝胶电泳时，可以先将RNA置于65℃孵育10 min，再上样检测。